根據(jù)離子交換柱污染物的情況,也可以采用DNA酶等其它的酶類。無論使用哪一種酶處理后,都要重復上述qc污染物的清洗步驟,把酶清洗干凈。脂蛋白對分離介質(zhì)的污染比較嚴重,因為脂蛋白及其它脂類物質(zhì),很容易粘附在層析柱內(nèi),{zh0}在進 行分離工藝前先將其去除。推薦使用硫酸葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮等沉淀劑,可去除高含量的脂蛋白。 對于物化結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定的介質(zhì),可用30℃~40℃的乙醇或丙酮進行洗脫或浸泡,在高溫下可使吸附在介質(zhì)上的蛋白變性或加快擴散速度,也有利于膠體物質(zhì)的破壞,從而使污染物脫離介質(zhì)。還可在乙醇或NaOH溶液中加入NaCl,更有利于介質(zhì)的復蘇。
使用有機溶劑后,離子交換柱要采用鋸齒形的梯度洗滌進行清洗,即可以在5倍床體積內(nèi),使溶劑的含量從0增至{bfb},然后在下一個 5倍床體積中,使溶劑的含量從{bfb}降到0。如果經(jīng)過上述處理,離子交換柱的工作情況仍沒有恢復,可以使用蛋白水解酶,將仍滯留在介質(zhì)內(nèi)的蛋白 質(zhì)進行水解,使其脫離介質(zhì)??梢圆捎煤?mg/mL 胃蛋白酶的0.1mol/L 乙酸溶液及0.5 mol/L 的 NaCl 溶 液注入到交換柱中,在室溫下浸泡過夜,或在37℃下浸泡一小時。
qc沉淀蛋白、脂類、疏水性的蛋白及脂蛋白,處理步驟更為復雜??刹捎脅bfb}的異丙醇、20%的乙腈、2mol/L的NaOH溶液、75%的乙酸、20%的乙醇、{bfb}的甲醇或6mol/L的鹽酸胍、陽離子或非離子洗 滌劑等作為處理液。在用過這些清洗劑后,都要用至少2倍體積的蒸餾水進行清洗。
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